概述

细胞库检定中PCR试剂盒的开发

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市场背景：根据《中国药典》2020版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质蜇控制，用于生产抗体类药物、蛋白类药物、细胞治疗产 品等生物制品的细胞系／株，需通过全面的细胞检定，并经国家药品监督管理部门批准。所以我司的细胞库分析项目是生物药进入市场的必不可少的 重要一环。技术难点：细胞库检定中PCR试剂盒的开发，例如牛多瘤病毒、猪圆环病毒、鼠源性病毒等病毒检测。PCR几大难点．高GC含量模版(DNA序列中，G-C之间的三对氢键通常需要较高能量解链，模板很难打开，易形成复杂的二级结构，DNA聚合酶难以推进。因此高GC含量(G+C>=60%) DNA 序列在常规PCR条件下比较难扩增）；长片段模版（长片段DNA序列在PCR过程中易损伤，使其断裂或脱嘌呤，导致长片段PCR无法进行。Taq酶具有 一定的错配率，导致产物链3'端出现错配碱基，链合成提前终止。非特异性扩增也会干扰长片段的延伸）低纯度模版（低纯度模板中可能含有PCR 抑制剂残留，如蛋白酶k、苯酚和EDTA;残留的盐分或离子，如K+,   Na+ 等也可能会抑制DNA聚合酶，从而影响PCR扩增）低浓度模版（模板浓度  是决定Ct的最主要因素，需寻求技术专家将其控制在一个合适范围内，使Ct在15-35之间。低浓度模板不仅会影响PCR效率降低得率，甚至无扩增产物）