去甲基化酶ALKBH5蛋白液相-固相-液滴相转化验证方法

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去甲基化酶ALKBH5蛋白液相-固相-液滴相转化验证方法
申请号:CN202510689641
申请日期:2025-05-27
公开号:CN120648747A
公开日期:2025-09-16
类型:发明专利
摘要
本发明公开了去甲基化酶ALKBH5蛋白液相‑固相‑液滴相转化验证方法,涉及蛋白改性技术领域,包括以下步骤:基于PONDR算法对ALKBH5蛋白进行结构有序性分析和划分,获得N端有序区、中间高度有序区和C端无序区;分别将所述N端有序区、所述中间高度有序区和所述C端无序区构建在pCDN3.1‑EGFP载体中融合蛋白表达,获得所述N端有序区、中间高度有序区和C端无序区的蛋白相变结果;所述蛋白相变结果包括N端有序区在细胞核内呈现弥散分布,中间高度有序区在细胞质内聚集呈现固态,C端无序区在细胞核内呈现液滴状分布;通过引物合成将NheI和KpnI酶切片段加入到三个对应的蛋白片段的DNA扩增引物序列上,再分别通过脂质体瞬转到HEK293T细胞中,转染后表征验证,获得ALKBH5蛋白验证结果。
技术关键词
验证方法 液滴 固相 液相 产物纯化 融合蛋白 载体 体式显微镜 单克隆 引物 切片 荧光显微镜 改性技术 电镜 固态 序列 形态 算法