一种猪肠道冠状病毒4重微流控RT-GPCR探针方法

本发明公开了一种猪肠道冠状病毒4重微流控RT‑GPCR探针方法，属于动物疫病分子检测技术领域。所述方法包括：(1)设计针对PEDV、PDCoV、SADS‑CoV、TGEV的特异性引物探针组合，探针标记不同荧光基团(FAM/HEX/Cy5/ROX)；(2)构建集成核酸提取、RT‑PCR扩增及荧光检测的PDMS‑纸基微流控芯片；(3)开发便携式检测仪，集成温控模块与多通道光学传感器。样本经裂解液处理后注入芯片，通过气动微阀驱动流体依次完成磁珠核酸纯化、四重RT‑PCR扩增(42℃逆转录→95℃预变性→40循环扩增)及荧光信号采集。10分钟内完成4种病毒同步检测，灵敏度达50copies/μL，成本不足常规PCR的1/5，适用于养殖场现场快速筛查。